质粒转染_质粒转染步骤

转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程质粒转染对于哺乳细胞蛋白的表达至关重要，转染的方法和步骤直接影响着转染的成

转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程质粒转染对于哺乳细胞蛋白的表达至关重要，转染的方法和步骤直接影响着转染的成功与否现在一起学习一下质粒转染的具体步骤：。

以24孔板培养的哺乳动物细胞为例：1、种细胞；a、贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2×10E5个细胞接种于500ul培养基中，在转染时细胞可长至90-95%汇合度b、悬浮细胞：在配置转染液前每孔4-8×10E5个细胞接种于500ul培养基中。

2、转染液配置，每孔细胞用量如下：A. 用50ul无血清培养基稀释质粒DNA，轻轻混匀B. 取适量合适的质粒转染试剂在50ul无血清培养基中稀释，室温孵育5minC. 将前两步所稀释的DNA和质粒转染试剂混合，轻轻混匀，室温放置30min。

3、在每孔细胞中加入混合后的转染液，轻轻摇匀4、贴壁细胞可在转染4-6h后更换完全培养基，悬浮细胞可在转染后18-48h间进行细胞换液，转染18-48h后可检测基因mRNA水平表达如果检测蛋白表达，需在转染后48-72h收集细胞样品。

5、对于稳定转染，在转染24h后以1:10传代培养，第二天可加入选择培养基。

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